O que é GPT?

O Teste de Promoção de Crescimento (GPT) determina a adequação do meio de cultura a ser usado na amostragem de monitoramento ambiental. O meio é desafiado com um pequeno número de microrganismos para garantir que as propriedades nutritivas, funcionalidade e qualidade do meio sejam adequadas para a detecção e enumeração de contaminantes microbiológicos.

O teste é descrito nos seguintes documentos:

• Capítulo USP <61>, Exame Microbiológico de Produtos Não Estéreis: Testes de Enumeração Microbiológica
• Capítulo USP <62>, Exame microbiológico de produtos não estéreis: testes para substâncias especificadas
• Capítulo USP <71>, Teste de Esterilidade
• Capítulos 2.6.12, 2.6.13 e 2.6.1 da Farmacopeia Europeia

O teste pode ser executado em meio sólido e em caldos de acordo com a Farmacopeia Europeia e dos Estados Unidos. A GPT é realizada inoculando o produto com ≤ 100 UFC de microrganismos, definidos pela farmacopéia. O teste pode ser quantitativo, no qual 50 – 200% dos microrganismos inoculados devem ser recuperados após a incubação do meio, ou pode ser qualitativo, onde a exigência é “crescimento” ou “sem crescimento”.

É importante ressaltar que o GPT deve ser testado para cada novo lote de meio. A promoção do crescimento deve ser verificada em meio ágar e caldo nutritivo, mas não em caldo diluído.

Procedimento

O procedimento a seguir está resumido abaixo:

1. O novo meio é inoculado com 100 ou menos UFC de microrganismos.
2. Os microrganismos recomendados pela farmacopeia são usados no teste. Os microrganismos não devem ter mais do que 5 passagens removidas do lote de sementes da cultura de referência original.
3. Após a incubação, o crescimento no novo lote de meio é comparado ao crescimento no lote de meio previamente aprovado.

Os critérios de aceitação para este teste, conforme descrito no Capítulo USP <61>, são:
“Se estiver testando ágar, o número de colônias no novo lote de meio deve estar dentro de um fator de dois do número de colônias no meio previamente aprovado. Se estiver testando caldo, o meio novo e previamente aprovado deve ser comparável em aparência. ”

É importante esclarecer que um fator de dois significa que o número de colônias no novo ágar não deve ser mais do que duas vezes e não menos da metade do número de colônias no ágar previamente aprovado. Por exemplo, se o número de colônias no ágar previamente aprovado for 30, o número aceitável de colônias no novo ágar deve estar na faixa de 15 a 60.

Lembre…

Para garantir uma GPT bem-sucedida, siga as seguintes recomendações:

• Teste a nova mídia e a mídia aprovada anteriormente lado a lado.
• Ao testar o meio seletivo, teste o meio não seletivo em paralelo.
• Use um espalhador para espalhar o inóculo de forma que as células não grudem umas nas outras.
• Use um misturador de vórtice para misturar a suspensão após a entrega de cada inóculo.

Microorganismos Recomendados

Microorganismos	Promoção de crescimento (aeróbio)
	Contagem microbiológica aeróbia total	Contagem total de leveduras e bolores
Estafilococo aureus           ATCC 6538 *^	Agar Digestivo de Soja-Caseína e Caldo, 30 –35 ,  3 dias
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ~	Agar Digestivo de Soja-Caseína e Caldo, 30 –35 ,  3 dias
Bacilo subtilis                       ATCC 6633	Agar Digestivo de Soja-Caseína e Caldo, 30 –35 ,  3 dias
Cândida albicans                  ATCC 10231	Agar Digestivo de Soja-Caseína e Caldo, 30 –35 ,  5 dias	Agar Sabouraud Dextrose 20 –25 ,  5 dias
Aspergillus brasiliensis        ATCC 16404	Agar Digestivo de Soja-Caseína e Caldo, 30 –35 ,  5 dias	Agar Sabouraud Dextrose 20 –25 ,  5 dias

 

Monitorando Anaeróbios

O monitoramento do ambiente anaeróbio não é um processo de rotina, mas é ocasionalmente realizado para detectar potenciais contaminantes microbianos anaeróbicos, particularmente aqueles relacionados à contaminação pelo pessoal.

Para fins práticos, existem três categorias de anaeróbio:

1. Obrigatório, os que são prejudicados pela presença de oxigênio.
2. Aerotolerante, que não pode usar oxigênio para o crescimento, mas tolera sua presença.
3. Facultativo, que pode crescer sem oxigênio, mas usa oxigênio se estiver presente.

Cepas de controle anaeróbico sugeridas:

• Propionibacterium acnes ATCC 11827 ou 6919 (Gram-positivo, anaeróbio aerotolerante)
• Clostridium sporogenes ATCC 19404 or 11437 (gram-positivo, anaeróbio obrigatório)*
• Bacteroides fragilis ATCC 25285 (bactéria gram-negativa, anaeróbia obrigatória, em forma de bastonete. Faz parte da flora normal do cólon humano e é geralmente comensal)

Placas de Ágar

Placas microbiológicas regulares ou placas de contato podem ser usadas para a GPT de anaeróbios. Eles podem conter Agar de Soja Tríptica (TSA) ou Agar Sabouraud Dextrose (SDA), e ser suplementados com neutralizadores de uma ampla gama de desinfetantes ou antibióticos β-lactâmicos para monitorar superfícies secas e higienizadas. Neutralizadores como lecitina (L), Tween® 80 (T), histidina (H) e tiossulfato de sódio (Th) são capazes de inativar resíduos de desinfetantes, uma ampla gama dos quais são usados em todo o mundo para desinfecção. As placas de TSA podem ser incubadas com segurança na faixa de 30 ° C a 37 ° C para esses anaeróbios.

 

Esperamos que isso tenha fornecido informações úteis para ajudá-lo a começar a monitorar microrganismos anaeróbios para GPT. 

 

Verifique também nossos monitores microbiológicos aqui.